Prinsip pengembangan untuk memilih garam buffer

Banyak metode fase cair usebuffer salts. Telah menemukan bahwa banyak orang tidak memahami penerapan garam penyangga dalam metode fase cair, jadi saya ingin berbagi beberapa pandangan saya dan menstimulasi.

1. Waktu untuk menerapkan garam buffer

Jika sampel atau kotoran kunci yang dipelajari dalam sampel memiliki faktor ionisasi, kasus tertentu lainnya akan didiskusikan secara terpisah. Di antara komponen dengan tren ionisasi yang kuat, beberapa dalam keadaan molekul dan menggabungkan lebih baik dengan fase terbalik fase stasioner kromatografi; Yang lain adalah dalam keadaan ionik dan memiliki afinitas yang lebih kuat untuk fase seluler. Jika keadaan ionisasi dari keadaan molekul dan keadaan ionik tidak dikendalikan dengan menggunakan garam penyangga, mudah untuk memiliki ekor puncak dan bifurkasi. Dalam hal ini, sistem air dan organik tidak boleh digunakan sebagai fase bergerak, dan garam buffer dan sistem organik harus dipilih.

2. Kapasitas buffing dan pilihan pH garam buffer

Saat menggunakanGaram elektrolit bufferPada fase seluler, seharusnya memiliki kapasitas buffing tertentu. Jika mengurangi jumlah injeksi sampel dapat meningkatkan bentuk puncak, itu dapat menunjukkan bahwa kapasitas buffing dari larutan garam buffer tidak mencukupi. Kapasitas buffing dari larutan garam buffer terkait dengan konsentrasi garam buffer dan nilai pH dari larutan garam buffer. Semakin tinggi konsentrasi garam buffer, semakin kuat kapasitas buffering; Semakin dekat nilai pH larutan garam buffer adalah untuk PPA, semakin kuat kapasitas buffing. Secara umum, nilai pH dari solusi garam buffer harus dalam rentang pKa ± 1. Untuk memastikan bahwa waktu penyimpanan dari utama Komponen tidak dibagi dengan sangat banyak karena sedikit perubahan dalam nilai pH, nilai pH dari larutan garam buffer harus luar rentang sampel pKa ± 2.

3. Panjang gelombang manset garam penyangga

Setiap garam pemoles memiliki panjang gelombang pemotong yang sesuai, dan panjang gelombang deteksi metode ini harus tidak kurang dari panjang gelombang pemotong larutan garam. Lebih dekat panjang gelombang deteksi adalah pada panjang gelombang penghenti fase seluler, semakin tinggi kebisingan baseline, semakin besar kesalahan nilai respons, dan semakin kecil nilai respons komponen dan sensitivitas.

4. Ide umum untuk pengaplikasian garam buffer

1. Konsentrasi garam penyangga umumnya 10-50 mmol/L. Konsentrasi garam penyangga harus dipilih sesuai dengan sifat sampel dan jumlah injeksi untuk memenuhi kapasitas buffer yang diperlukan.

2. Proporsi maksimum yang diizinkan dari fase organik dalam gradient elution harus ditentukan dengan mencampur eksperimen dari garam buffer dan fase organik. Proporsi fase organik garam penyangga yang berbeda harus diambil untuk menentukan proporsi maksimum yang diizinkan dari fase organik, seperti 10:90, 20:80, 30:70, dll. Garam penyangga tidak boleh diatur pada proporsi tinggi pada instrumen untuk mencegah curah hujan garam penyangga merusak instrumen.

3. Pilih garam penyangga sesuai dengan banyak kendala seperti panjang gelombang cutoff, nilai pH, dan kapasitas buffing, dll. Sebagai contoh, jika panjang gelombang deteksi pada penyerapan akhir, Fosfat umumnya harus dipilih.

4. Solusi garam biasa buffer termasuk: 0.1% asam fosfor/asam trifluoroasetik/asam asetat/larutan asam formik, 0.02. 1-0. 05mol/L larutan kalium dihidrogen fosfat (disesuaikan dengan 3.0 pH dengan asam fosfor), dll.

5. Untuk senyawa alkaline, garam potasium lebih disukai, yang dapat lebih baik mengurangi efek tailing.