Analisis pada penggunaan Pfizer/BioNTech terhadap RNase-free HEPES Buffer dalam pembuatan vaksin COVID-19

Pfizer/BioNTech menggunakan penyangga HEPES bebas RNase selama pembuatan vaksin mRNA COVID-19

Laporan tinjauan EMA untuk vaksin COVID-19 Pfizer/BioNTech menyebutkan bahwa pembuatan zat aktif untuk vaksin BNT162b2 terdiri dari lima langkah utama. Di antaranya, molekul RNA disaring dari DNA linier olehIn buketTranskripsi (IVT)

Diikuti dengan pemurnian dan filtrasi multilangkah.

Laporan tersebut direkomendasikan bahwa Sponsor menerapkan strategi pengujian untuk memastikan kontrol teliti yang memadai dari material awal dan yang mengangkat buffer dalam rumus buffer bebas RNase.

Mengenai spesifikasi ekstraksi, laporan tersebut menyatakan bahwa bantuan pemrosesan etanol dan asam sitrat buffer harus dikontrol sesuai dengan apoteker Eropa (Ph.Eur.), dengan penyangga HEPES dan spesifikasi EDTA yang ditetapkan terhadap zat aktif.

Dari sana, Pfizer/BioNTech menggunakan penyangga HEPES dalam pembuatan vaksin mRNA COVID-19. Laporan peninjauan juga menekankan perlunya penyangga HEPES untuk bebas RNase.

Berdasarkan kertas pada formulasi lpx-mrna yang diterbitkan oleh BioNTech pada tahun 2016, HEPES buffer digunakan dalam solusi stok mRNA perusahaan. Bisa diberi tahukan bahwa BioNTech menggunakan HEPES sebagai sistem penyangga untuk larutan stok RNA selama produksi vaksin mRNA COVID-19.

Ada banyak penelitian dari HEPES sebagai penyangga untuk reaksi IVT

HEPES digunakan sebagai penyangga dalam solusi stok mRNA, yang mungkin terkait erat dengan IVT polimer RNA ASE.

Penggunaan sepasang penyangga HEPES untuk reaksi IVT dilaporkan dalam studi seawal 1987. Dalam studi, RNA polimerase dari virus hematopoietik menular (IHNV) kecocokan untuk IVT Dalam kondisi reaksi yang berbeda. Hasil menunjukkan bahwa penyangga HEPES dapat memaksimalkan efisiensi IVT dibandingkan dengan buffer Tris.

Studi menunjukkan bahwa, dibandingkan denganTromethamine TRIS buffer, Sintesis RNA adalah threefold lebih tinggi ketika HEPES digunakan sebagai penyangga (Ara. 1a), dan konsentrasi optimal penyangga HEPES adalah 400 mM.

Robin Shattock, direktur dari Departemen Penyakit Menular di Perguruan Tinggi Imperial, teknologi, dan obat-obatan, adalah ahli otoritas di bidang vaksin mRNA dan bekerja sama dengan BioNTech, PNI dan perusahaan bioharmaceuttikal terkemuka lainnya. Tim nya menerbitkan kertas pada optimasi IVT saRNA pada tahun 2021 dan menyatakan bahwa penggunaan 40 mM HEPES sebagai penyangga untuk reaksi IVT berkontribusi pada efisiensi IVT yang lebih tinggi. Keluhan dilakukan oleh skrining dan penyelidikan faktor utama yang memengaruhi IVT saRNA.

Menurut laporan pada lpx-mrna rumus yang diterbitkan oleh BioNTech pada tahun 2016, buffer yang digunakan dalam solusi stok mRNA perusahaan adalah HEPES. Dalam studi, RNA-LPX disiapkan dengan menyiapkan 1 Tup ml larutan stok RNA menggunakan HEPES buffer.

Menurut sastra yang relevan, HEPES memiliki keunggulan sebagai penyangga untuk reaksi IVT, yang kami yakin adalah alasan mengapa BioNTech menggunakan sepasang HEPES buffer sebagai sistem buffer untuk solusi stok mRNA.

Kelebihan terkemuka HEPES dibandingkan dengan sistem penyangga lain

1. pKa HEPES bervariasi sangat sedikit dengan suhu, dan pH pergeseran sedikit dengan suhu.

2. Properti stabil. HEPES, pada satu tangan, tidak kompleks dengan ion lain dan mempengaruhi fungsi ion lainnya; Pada tangan lain, kehadiran ion lain tidak memengaruhi kapasitas buffing dari HEPES.

3. pH dalam media budaya sel terutama dikelola oleh bicarbonat dan 5% CO₂Sedang Ketika sel-sel berada di lingkungan terbuka, CO₂Melarikan diri dapat menyebabkan kenaikan pesat dalam rentang fisiologis, tetapi bukan issUe untuk media dilengkapi dengan sepasang penyangga HEPES.

4. HEPES tidak dapat dengan mudah menembus biofilms dan tidak mengganggu reaksi biokimia dalam sel.

Pengamanan untuk menggunakan sistem penyangga HEPES

1. Karena adanya piperazine moiety, H₂O₂Diproduksi saat hepe diekspos cahaya, yang beracun terhadap sel budidaya atau zat aktif lainnya. HEPES tidak boleh digunakan bersama dengan zat sensitif redoks. HEPES sebagai penyangga harus digunakan dari sinar matahari langsung.

2. HEPES umumnya digunakan pada konsentrasi 10-25mm dalam produk biokimia. Memiliki kapasitas buffer lemah saat konsentrasinya lebih rendah dari 10 mM, dan mungkin memiliki efek beracun pada beberapa sel ketika konsentrasi lebih tinggi.

AVT LtdMemasok trehalose tingkat parenteral, sukrosa, TRIS/tris-penyangga HCl, buffer HEPES, dan bioprotectasi dan solusi buffer lainnya secara permanen. KitaDNase & RNase-freeProduk parenteral dengan endotoksin ultra-rendah diproduksi sesuai dengan GMP saat ini, dan telah terdaftar di Tiongkok dan Amerika, memenuhi standar apoteker dari negara utama. Dengan produk kami, kami berkontribusi pada manufaktur dan pendaftaran Anda di Tiongkok dan/atau negara lain dari vaksin protein rekombinan, vaksin mRNA, vaksin vektor adenovus, liposome, sensitivitas tunggal dan ganda, ADCs dan obat biologis lainnya!

Referensi:

1. GAEL KURATH * t, LEONG J C. Transkripsi dalam Darwin dari Virus Necrosis solenoid, sebuah rhabdovus ikan [J]. Jurnal virologi umum, 1987(68): 1767-1771.

2. Samnuan K, Blakney AK, mclay PF, Shattock RJ. Desain-eksperimen dalam bentuk transkripsi plus pengoptimalan hasil RNA penguat mandiri bioRxiv; 2021.

3. Laporan penilaian, nama umum: COVID-19 vaksin mRNA (dinosi-dimodifikasi).