AVT (Shanghai) Pharmaceutical Tech Co., Ltd.

Penelitian tentang penggunaan trhalose dalam pemesanan cryoplengkap seluler: pemesanan cryop sel batang turunan Adipose

Dalam masalah sebelumnya, kami membagikan studi penggunaan D(+)-trehalose dihidrat dalam reservasi kricara manusia oligobristyte presursor sel (OPCs). Studi ini kesimpulan bahwa cryopreservasi medium ditambahkan dengan D(+)-trehalose dihidrat cocok untuk jangka panjang pemesanan OPCs dan membantu meningkatkan tingkat pemulihan sel.


Dalam masalah ini, mari lihat studi cryoprotectant (CPA) dari D(+)-trehalose dihydrate + gliserol dalam reservasi sel induk adipose (ADSCs) untuk mempromosikan penyembuhan luka.



Studi CPA of D(+)-trhalose dihydride + gliserol dalam reservasi KK ADSCs untuk mempromosikan penyembuhan luka



1. ADSCs dan cryoproteclans


Sel batang turunan adiposa (ADSCs) memiliki potensi untuk membedakan menjadi sel asal mesodermal, seperti sel adipogenik, osteogenic, dan chondroogenik, dan juga memiliki efek imunosisi belakang, yang memiliki wawasan aplikasi klinis dalam obat regenerasi dan perawatan gangguan kekebalan tahan api. Penelitian ADSC telah menjadi salah satu bidang penelitian populer di komunitas medis.


Salah satu masalah dalam terapi ADSC saat ini adalah reservasi kristal ADSCs yang efisien dan aman. CPA tradisional adalah 10% DMSO + 90% FBS. Namun, penggunaan DMSO dalam jangka panjang pemesanan sel Kriopreservasi dapat meningkatkan tingkat apoposis karena DMSO adalah sitostatik dan mengganggu proses metil DNA tisu, sementara FBS mengandung protein turunan hewan xenogen yang dapat memperkenalkan virus zoonotik atau dapat menyebabkan reaksi alergi. Oleh karena itu, CPA ini tidak cocok untuk penggunaan klinis.


Peneliti dari Afiliasi Rumah Sakit orang kesembilan untuk Shanghai Jiao Tong University School of Medicine yang ditemukan di AwalnyaIn buketEksperimen bahwa CPA komposit 1.0 mol/L D(+)-trhalose dihydrate + 20% gliserol menunjukkan tidak ada perbedaan statistik dalam viabilitas sel, kemampuan gulir sel saat digunakan untuk reservasi kristal ADSCs dibandingkan dengan CPA tradisional, tetapi kapasitas migrasi secara signifikan lebih baik.


Para peneliti telah menjelajahIn vivoEfek biologi dari post-thaw ADSCs cryopreservasi di atas komposit CPA dalam model luka mouse.


2. Persiapan CPAs


① Komposit CPA (kelompok uji): 1.0 mol/L D(+)-trhalose dihidrasi + 20% gliserol, dengan larutan fosfat buffered saline (PBS, pH 7.4).

② Tradisional CPA (Grup Kontrol 1): 10% DMSO + 90% FBS.

③ Garam Normal (kelompok kontrol 2): tanpa cryoprotectant apa pun.

CPAs disiapkan sebelum untuk digunakan dan disaring melalui filter 0.22 μm.


3. Hasil belajar


① Cell viability and morphology:


Sel stem turunan adiposa (ADSCs) kristal dengan CPA komposit mempertahankan kemampuan sel dan morfin yang baik setelah pencairan. Tidak ada perbedaan signifikan dalam jumlah sel di seluruh test group, control group 1 dan fresh ADSCs group. Morfin sel ADSCs dari tiga kelompok di atas pada dasarnya tetap sama setelah berbudaya dalam inkubator selama 72 jam.

avt-pharma-20230529-9.jpg

avt-pharma-20230529-10.jpg

Kartu penyembuhan ② Wound:


Ke dalam luka model luka tikus, ADSCs cryopreservasi dengan komposit CPA, ADSCs segar dan saline normal sekali.


Pada hari ke-7, laju penyembuhan luka untuk CPA komposit jauh lebih tinggi dibandingkan dengan grup kontrol 2, dan tidak ada perbedaan signifikan dibandingkan dengan grup ADSCs segar.


Pada hari ke 14, luka penyembuhan untuk tiga kelompok mengikuti tren yang sama.

avt-pharma-20230529-11.jpg

③ Efek pada luka re-epialisasi dan kolagen depotion


Pada hari ke 14, luka re-epialisasi lebih baik untuk test group dan grup ADSCs fresh, yang tisu granulasi terbentuk dan collagen terdistribusi dengan merata dan teratur. Hasilnya menunjukkan bahwa ADSCs cryopreservasi dengan CPA komposit memiliki fungsi biologi untuk mempromosikan luka lintialisasi dan deposisi kolagen yang mirip dengan ADSCs segar.

avt-pharma-20230529-12.jpg


④ Efek pada kapasitas angigenesis

CD31, juga dikenal sebagai molekul adhesi sel endrometer, terutama digunakan untuk menunjukkan kehadiran sel endometer dan menilai angiogram. Pewarnaan imunofluoresensi CD31 biasanya dilakukan untuk meneliti angiogenesis dalam jaringan terinfeksi selama perawatan.


Pada hari ke 7 dan 14, pemeringkatan ofluoresensi CD31 dilakukan pada jaringan luka dan data kuantitatif yang diambil. Hasil menunjukkan bahwa kedua ADSCs cryopreservasi dengan CPA komposit dan ADSCs segar dapat secara efektif mempromosikan angigenesis.

avt-pharma-20230529-13.jpg

avt-pharma-20230529-14.jpg

4. Diskusi


Penyembuhan luka adalah proses ologis yang dinamis dan kompleks yang melibatkan koordinasi mutual antara sel, faktor pertumbuhan, matriks ekstrasellular, saraf, serta pembuluh darah.


Sel batang turunan adiposa (ADSCs) adalah jenis sel batang mesenchymal dewasa, yang dapat meningkatkan depilasi kolagen, vaskulariasi jaringan melalui paracin dari berbagai cytokine, dan berpartisipasi dalam peraturan imun untuk mendorong penyembuhan luka. Selain itu, ADSCs dapat membedakan menjadi sel kerang, keratinitas dan fibroblasts dermal, yang secara langsung mendorong penyembuhan luka.


ADSCs biasanya diperoleh melalui prosedur bedah. Potensi syok multilineage dari ADSCs berkurang secara signifikan dengan peningkatan donor age. Jika ADSCs diperoleh dari donor muda melalui operasi tunggal Dapat Dipesan kristal, dan kemudian digunakan beberapa kali sesuai kebutuhan, biaya perawatan pasien dapat berkurang secara signifikan, dan dampak donor usia pada hasil perawatan dapat berkurang.


Dalam studi ini, model "mouse dorsal wound" digunakan untuk membandingkan efek terapi dari cryopreservasi ADSCs setelah pencairan dan ADSCs segar. Menurut hasil, ADSCs cryopreservasi dengan CPA komposit menunjukkan kapasitas yang sama untuk mendorong penyembuhan luka sebagai ADSCs segar setelah mencairkan. Menggunakan cryoprotectant komposit 1.0 mol/L D(+)-trehalose dihidrasi + 20% gliserol untuk pemesanan Kriya ADSCs tidak memengaruhiIn vivoFungsi biologis dari sel.


Cryoprotectasi komposit dapat memberikan efek pelindung pelengkap selama pembekuan sel melalui mekanisme yang berbeda.


D(+)-trehalose dihydride, sebagai cryoprotectant yang tidak berpori, memiliki berat molekul yang relatif rendah dan membentuk membran pelindung pada permukaan sel, mengurangi kerusakan KK pada sel. Namun, D(+)-trhalose dihydride tidak dapat menembus membran sel, membatasi efisiensi perlindungannya.


Gliserol, sebagai krioprotektor berpori, memainkan peran pelindung dengan meningkatkan viskositas solusi dan mengurangi formasi es kristal, dan dapat membantu D(+)-trehalose dihydrat menembus membran sel untuk meningkatkan efek pelindung D(+)-trhalose dihydrate.


Studi ini menunjukkan bahwa komposit CPA D(+) yang aman dan tidak beracun-trehalose dihidrat + Gliserol dapat secara efektif melindungi tujuan dan fungsi biologis dari ADSCs selama pembekuan, dan pastikan bahwa sel memiliki efek yang sama dalam mempromosikan regenerasi tisu sebagai ADSCs segar setelah mencairkan. Ini adalah cryoprotectan sel stem aman secara biologi dengan wajan aplikasi klinis yang besar.