Aplikasi Trehalose dalam sel pemesanan Kristal: pemesanan cryop dari sel kuman testis tikus

Dalam dua masalah sebelumnya, kami membagikan studi yang relevan pada penggunaan D(+)-trehalose dihidrat untuk reservasi kriopi sel presursor yang turunan manusia (OPCs) dan sel batang yang turunan adiposa (ADSCs). Studi tersebut menemukan bahwa menambahkan sejumlah D(+)-trehalose dihydratic pada media reservasi kristal atau menggunakan cryoprotectant komposit D(+)-trehalose dihydrate + Gliserol dapat meningkatkan tingkat pemulihan sel batang setelah reservasi kristal jangka panjang, sehingga menjadikan aplikasi klinis selanjutnya dari sel batang untuk perawatan penyakit atau perbaikan luka.

Dalam masalah ini, kami mengambil pemesanan sel kuman testis tikus sebagai contoh untuk menjelajahi wawasan aplikasi D(+)-trhalose dihidrat dalam bidang reproduksi bantuan.

Efek dari cryoprotectasi berbeda pada cyroreservasi sel testis kuman pada tikus yang belum matang

Latar belakang reservasi kristal sel kuman testis

Dalam beberapa tahun terakhir, dengan perkembangan pesat dari teknologi reproduksi bantuan, telah menjadi memungkinkan bagi pria yang lebih kenamaan untuk memberi kelahiran anak. Dalam proses tersebut, reservasi kristal jangka panjang atas sel terkait reproduksi telah menjadi salah satu kesulitan teknis utama yang memengaruhi tingkat keberhasilan.

Misalnya, untuk pasien laki-laki prapenitas dengan kanker, perawatan dengan kutikula gonadal dapat menyebabkan hilangnya kesuburan permanen, dan reservasi kristal jangka panjang pada tisu atau sel testis pada suhu rendah adalah sarana penting untuk memelihara kesuburan mereka.

Namun, untuk pasien dengan tumor sperma, transplantasi autolog tisu testis cadangan setelah pencairan risiko terhadap sel kanker. Mempertimbangkan sel kanker dapat terisolasi dari suspensi sel testis dan sel stem gonmatoid (SSCs) dapat berbudaya dalam Darwin untuk dibig ke dalam matiper bulat, memberikan lahir kepada anak dapat dicapai dengan injeksi spermatid bulat.

Oleh karena itu, untuk pasien laki-laki prapentum dengan kanker, reservasi kristal jangka panjang sel kuman adalah salah satu cara kunci untuk mengatur kesuburan pria dan memiliki potensi nilai aplikasi klinis.

Zhang Xiaolong dari rumah sakit masyarakat Provinsi Henan dan peneliti lainnya menggunakan tikus tua dua minggu untuk simulasi keadaan pengembangan tisu testis manusia yang belum matang sebelum pubertas, dan mengadopsi protokol reservasi cryopreservasi yang berbeda untuk sel kuman micvelcro mouse untuk menjelajahi metode reservasi terbaik.

Membandingkan efek dari berbagai cryoprotectans

Dalam studi, media reservasi kristal dibagi menjadi 5 kelompok berikut sesuai dengan berbagai komponen:

Suspensi sel kuman testis tikus disiapkan oleh hidroolisis dua langkah, keluaran, dan ditransfer ke botol kriogenik setelah menambahkan masing-masing lima cryoprotectasi yang berbeda. Botol kriogenik tunduk pada pembeku, diambil dari tangki nitrogen cair setelah 2 bulan, dan dipulihkan untuk mendeteksi tingkat bertahan hidup sel, tingkat apoposis, dan potensi membran mitobusa.

Hasil belajar

① Tingkat bertahan hidup sel dan tingkat pemulihan sebelum dan setelah reservasi kristal

Dibandingkan dengan itu sebelum reservasi kristal, tingkat kelangsungan hidup sel setelah reservasi kristal berkurang dalam lima kelompok tes. Di antara mereka, tingkat kelangsungan hidup sel dan tingkat pemulihan dalam group E secara signifikan lebih tinggi daripada mereka yang berada dalam empat kelompok uji lainnya.

③ Tingkat Apoptosis

Laju apoptosis terdeteksi oleh flow cytometri (FC) di setiap grup. Hasil menunjukkan bahwa tingkat apoptosis meningkat secara signifikan di setiap grup tes dibandingkan dengan grup kontrol. Dalam lima kelompok tes, tingkat apoptosis dalam group E secara signifikan lebih rendah dibanding dalam empat kelompok tes lainnya.

④ Potensi membran mitobusa

Dibandingkan dengan grup kontrol, potensi membran mitobusa dari sel cadangan berkurang secara signifikan setelah pencairan dalam lima kelompok tes, dengan pengurangan terkecil dalam grup E, yang jauh lebih rendah dibandingkan itu dalam empat kelompok tes lainnya.

Diskusi

Cryoprotecsant dapat diklasifikasikan sebagai ditembus dan kedap air. Cryoprotecsant yang paling sering digunakan adalah sukrosa dan D(+)-trhalose dihydrate. Studi sebelumnya telah mengonfirmasi bahwa menambahkan sukrosa atau D(+)-trehalose dihydrate ke cryoproteclant secara signifikan dapat meningkatkan tingkat pemulihan sel kuman testis pada monyet atau tikus rhesa.

Hasil dari studi di atas menunjukkan bahwa menambahkan 0.1 mol/L sukrosa atau 0.1 mol/L D(+)-trehalose dihidrat pada cryoprotectant memiliki efek pelindung tertentu pada pemesanan sel, sementara menambahkan 0.1 mol/L sukrosa dan 0.1 mol/L D(+)-trhalose dihidrasi pada waktu yang sama secara signifikan meningkatkan tingkat pemulihan sel kuman tikus cryopreservasi setelah pencairan, Mengurangi tingkat apoptosis, dan mengurangi kerusakan pada potensi membran mitobusa yang disebabkan oleh reservasi KK.

Namun, sitoktasi yang disebabkan oleh konsentrasi DMSO yang lebih tinggi (15%) seimbang sebagian efek kriopelindung dari sukrosa dan D(+)-trhalose dihidrat.