AVT (Shanghai) Pharmaceutical Tech Co., Ltd.

Penelitian penerapan trhalose dalam pemesanan sel: OPC cryopreservasi

D(+)-trehalose dihydride adalah hidrolisis Arida yang stabil tidak mengurangi. Ia dapat membentuk film pelindung pada permukaan sel di bawah berbagai tekanan lingkungan seperti panas ekstrim, dingin, kering, efektif untuk secara efektif melindungi struktur dari molekul biologi dari kerusakan. Memiliki fungsi perlindungan non-spesifik yang sangat baik untuk sel biologi, dan dapat meningkatkan ketahanan sel biologi terhadap kondisi yang keras.


Dalam beberapa tahun terakhir, D(+)-trehalose dihydride telah banyak digunakan dalam produk biologi termasuk obat perpanjangan. Ini digunakan sebagai agen pelindung sekitar 30% dari obat bergaya di pasaran (termasuk ADCs), seperti Adcetris, Padcev, Imjudo, Kimmtrak, dll.


D(+)-trehalose dihydride juga memainkan peran yang semakin penting dalam pemesanan sel, reproduksi bantuan, dan bidang lainnya. Di sini, Tim produk AVT mendefinisikan sastra terkait berikut untuk membantu Anda memahami kemajuan penelitian yang relevan.


D(+)-trhalose dihydride untuk reservasi kristal OPCs


1. Transplantasi sel presursor oligokinsite (OPCs) untuk penyakit demyelinasi


Penyakit demyelinasi adalah gangguan neurologis yang ditandai dengan hilangnya selubung myelin, seperti cedera tulang belakang (SCI), multileris (MS), dll.


OPCs bisa membedakan ke dalam oligokpipa dewasaIn vivo, Yang penting sel mielinasi dari sistem saraf pusat dan enkapsulat kunyit untuk adalah struktur myelin. Oleh karena itu, transplantasi OPCs dianggap menjadi terapi yang sangat potensial untuk penyakit demyelinating.


2. Metode yang ada dan masalah untuk reservasi kristal OPCs


Cryopreservasi OPCs adalah langkah penting dalam keberhasilan transplantasi manusia OPCs.


Sebelum digunakan secara klinis, OPC manusia disediakan kembali dengan cryoprotectan 100 mL/L DMSO + 900 mL/L FBS (metode yang diajukan dalam 1984), dengan tingkat pemulihan 55% untuk 70%. Metode ini tidak dioptimalkan untuk waktu yang lama setelahnya.


Mengingat bahwa DMSO adalah cytoxic dan FBS adalah imunogenik, metode reservasi kristal di atas tidak cocok untuk penggunaan klinis.


Untuk menjelajahi metode reservasi cryoc manusia yang lebih ekonomis, efektif, aman, dan dapat diterapkan pada skala besar, liu Chang dari Universitas Medis selatan dan peneliti lainnya mengoptimalkan metode di atas menggunakan OPCs yang diinduksi oleh sel stem jaringan otak manusia (hNSCs).


3. Pengoptimalan metode untuk reservasi kristal OPCs


① Membandingkan efek dari metode yang berbeda pada tingkat pemulihan OPCs, ditemukan bahwa tingkat bertahan hidup sel yang dikumpulkan oleh pencerna secara signifikan lebih tinggi dibandingkan dengan pipet mekanik.


avt-pharma-20230529-15.jpg


1

Tabel 1: viabilitas sel dan laju pemulihan sebelum dan setelah pemesanan kristal menggunakan metode gangguan mekanik dan pencernaan

Group Group, 机 Group 、, grup pencernaan Mekanikal Group

Cryo A A 、 cryo cryob Cryoprotectant A Cryoprotectant B

Ability vivi ♡ 、 Viability sebelum semangat reservasi VR setelah pemulihan


② Membandingkan tingkat pemulihan OPCs cryopreservasi dengan empat media reservasi kristal berbeda dengan pendinginan lambat dalam kotak pembeku dan pendinginan cepat dalam tangki nitrogen cair fase uap.

Tidak.

Komposisi medium cryopreservasi

A

Media reservasi cryopreservasi mengandung 70 mL/L DMSO + 930 mL/L FBS

B

Serum bebas hPSC media reservasi kristal

C

OPS medium komplit isi 70 mL/L DMSO + 300 mL/L FBS

D

OPS medium lengkap yang mengandung 70 mL/L DMSO + 100 mL/L FBS + 300 mL/L HES

E

OPS medium komplit mengandung 70 mL/L DMSO + 300 mL/L FBS + 0.2 mol/mL D(+)-trhalose dihidrat


Seperti yang ditunjukkan di bawah ini, ada perbedaan signifikan secara signifikan dalam laju pemulihan untuk dua tingkat pendinginan. Laju pemulihan untuk empat cryoprotecsant kurang dari 30% dengan pendinginan cepat. Tingkat pemulihan untuk cryopreservasi medium E dilengkapi dengan D(+)-trehalose dihidrat adalah yang tertinggi dengan pendinginan lambat dalam kotak pembekuan, yang (75.73 ± 6.66)%.

avt-pharma-20


③ Membandingkan efek dari durasi reservasi kristal pada laju pemulihan OPCs


Sel cryopreservasi medium E dengan tingkat pemulihan tertinggi dipilih untuk Percobaan selanjutnya, dan tingkat pemulihan dibandingkan antara jangka pendek (<2 bulan) pemesanan cryoopreservasi dan jangka panjang (6 bulan) pemesanan kristal, menunjukkan tidak ada perbedaan signifikan dalam tingkat pemulihan antar kedua kelompok.


④ Peningkatan aktivitas tangki sel


Cryoreservasi medium E dengan tingkat pemulihan tertinggi dipilih untuk perbandingan pembuluh sel. Maksud aminasi beberapa dibandingkan antara Grup cryopreservasi medium E dan grup kontrol budaya normal setelah 3 kali bagian Seri pada saat yang sama, dan tidak ada perbedaan signifikan antara kedua kelompok. Setelah 7 hari budaya, tidak ada perbedaan signifikan dalam tingkat aminasi antara Grup budaya normal dan grup budaya pasca mencair. Hasil menunjukkan bahwa aktivitas duplikasi sel OPCs cryoreservasi dengan media reservasi cryopro yang mengandung D(+)-trhalose dihydrate, yang sebanding dengan sel yang tidak beku.


Janji


Studi menjelaskan bahwa OPCs induksi hNSC yang dikumpulkan oleh pencernaan dan berbudaya dapat disediakan dengan OPS medium lengkap yang mengandung 70 mL/L DMSO + 300 mL/L FBS + 0.2 mol/mL D(+)-trehalose dihydrate dalam waktu lama dengan pendinginan lambat dan pemanasan kembali cepat di kotak beku, dengan tingkat pemulihan rata-rata hingga 75%. Pemulihan setelah reservasi kristal tidak memengaruhi ekspresi penanda tertentu OPC dan kapasitas duplikasi.


D(+)-trehalose dihydride adalah sel tidak beracun membran-kedap air cryoprotectant dari banyak sumber, yang telah terbukti memiliki efek reservasi kristal yang baik untuk berbagai tipe sel seperti hPBSCs dan hESCs. Dalam studi ini, medium cryopreservasi dilengkapi dengan konsentrasi rendah D(+)-trhalose dihydrate mencapai tingkat pemulihan tertinggi dalam semua kelompok eksperimental, dan hasil replikasi dan ekspresi spidol setelah budaya ditunjukkan bahwa proses reservasi kristal ditambahkan dengan D(+)-trehalose dihydrate juga cocok untuk reservasi kristal OPCs manusia dan dapat meningkatkan tingkat pemulihan sel.