Kategori garam penyangga umum

Dalam kromatografi fase terbalik, pH fase seluler umumnya antara 2-7. Ketika analyte dapat menonaktifkan dalam kondisi fase terbalik, atau ketika pH sampel berada di luar rentang 2-7, aGaram penyanggaDiperlukan. Senyawa yang dapat menonaktifkan kondisi fase terbalik secara umum memiliki kelompok amino dan karboktil, dengan nilai pKa antara 1-11. Memilih pH penyangga yang benar dapat memastikan bahwa kumpulan fungsional yang tersosiasi ada dalam bentuk ionik atau formulir senyawa netral. Jika pH sampel berbahaya bagi kolom, maka solusi buffering dapat membuatnya ringan atau mengurangi bahaya. Rentang toleransi pH untuk kolom berbasis silika konvensional adalah 2-8. Garam elektrolit buffered umum diklasifikasikan sebagai berikut.

1. AlkalineBuffer salts

Aditif umum termasuk amonia dan triethylamine, keduanya dapat meningkatkan pH air ke tingkat yang sangat tinggi, cukup tinggi untuk membuang partikel gel silika. Oleh karena itu, mereka perlu digunakan dengan hati-hati. Selain itu, dua pelarut ini biasanya tidak mudah dilepas melalui metode pencucian dan perawatan. Terutama untuk triethylamine, bahkan jika itu adalah kemurnian kromatografis, itu dapat diperkaya karena kerusakan setelah penyimpanan dalam waktu yang lama.

2. AsamBuffer salts

1. Asam formik: biasanya digunakan dengan konsentrasi di bawah 1%, dapat meningkatkan pH air hingga sekitar 2.

2. Asam asetat: sedikit kurang asam daripada asam formik, biasanya digunakan pada konsentrasi tidak melebihi 5%, dapat meningkatkan pH air sampai sekitar 2.

3. Asam Trifluoroacetic: asam yang relatif kuat, biasanya digunakan pada konsentrasi yang tidak melebihi 0.5%, dapat mengurangi pH air hingga di bawah 2. Ini memiliki intensitas ion yang besar dan efek sepasang ion tertentu, dan sering digunakan sebagai aditif ketika menganalisis protein dan peptida. Masalah paling fatal dari tiga asam ini berada dalam penyerapan UV mereka pada panjang gelombang rendah. Biasanya tidak dianjurkan untuk menggunakannya pada panjang gelombang kurang dari 215nm. Selain itu, asam formik, asam asetat, dan asam trifluoroasetik adalah volatil dan konsentrasi dari produk iniGaram elektrolit bufferDapat berubah seiring waktu.

4. Asam fosfat: Ini adalah asam tidak menentu dengan intensitas ion yang baik. Yang terpenting adalah tidak ada daya serap latar belakang pada area UV dengan panjang gelombang rendah. Namun, ini juga memiliki beberapa kerugian, seperti tidak kompatibel dengan metode mass spectrometri. Selain itu, ada beberapa asam lainnya, seperti asam belerang, asam klorida, atau asam sitrat, tetapi keduanya langka.

3. GaramBuffer salts

Dibandingkan dengan bahan dasar asam sederhana, dengan menyesuaikan proporsi dua garam berbedaBuffer salts, Solusi buffer dengan pH tertentu dapat dengan mudah disiapkan, dan garam buffer dengan kemampuan buffing dapat mengontrol nilai pH fase seluler.

1. Garam membentuk: garam format yang umum digunakan dalam kromatografi cair adalah amonium untuk membentuk. Jenis garam ini memiliki kelarutan baik, benar-benar kompatibel dengan metode spektrometri massa cairan, dan memiliki dampak yang relatif kecil pada kolom kromatografi. Namun, Kekurangannya adalah intensitas ion yang relatif rendah. Selain itu, garam formate rentan terhadap pengiriman, membuatnya sulit untuk menimbang dan potensial volatil dalam fase seluler. Ketika dikombinasikan dengan asam formik, sistem format acid-amonium formate buffer dapat mencapai kemampuan buffing dalam rentang pH 3 ~ 4.5, hanya dengan menyesuaikan rasio keduanya.

2. Garam asetat: contoh umum adalah amonium asetat. Penggunaan garam asetat mirip dengan garam pembentuk, dan intensitas ion tidak tinggi. Sistem penyangga asar-amonium asetat dapat mengontrol pH dalam rentang 4 ~ 5.5.

3. Garam fosfat: Salah satu solusi buffer yang paling umum digunakan dalam HPLC dalam kondisi deteksi UV karena dapat digunakan pada panjang gelombang di bawah 220 nm. Garam fosfat memiliki tiga nilai PPA. Meskipun mereka banyak digunakan, perhatian harus dibayarkan pada masalah kelarutan mereka untuk mencegah mereka disemprotkan pompa HPLC atau kolom kromatografi di bawah kondisi konsentrasi tinggi.

Natrium dan garam kalium asam fosforik umumnya digunakan, dan kemampuan kontrol pH keduanya sangat mirip, hanya dengan sedikit perbedaan dalam intensitas ion. Dalam kebanyakan kasus, mereka dapat digunakan secara acak. Karena asam fosforik adalah asam polybasic, ia dapat membentuk fosfat monohidrogen dan fosfat dihidrogen, sehingga penggunaan sistem penyangga fosfat untuk menyesuaikan pH lebih fleksibel dan dapat menutupi rentang yang lebar, dan dapat memberikan intensitas ion yang tinggi. Sayangnya, sistem penyangga fosfat untuk fase seluler tidak cocok BLe dengan mass spectrometri.